小芯片讓五種植物病毒快速“現(xiàn)形”

　　在15分鐘內(nèi)可讀全部檢測(cè)結(jié)果，相較于傳統(tǒng)檢測(cè)一個(gè)病毒的十幾個(gè)小時(shí)，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。

　　2010年12月21日，在北京檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目《植物病毒蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)研究》專(zhuān)家驗(yàn)收會(huì)上，項(xiàng)目組研發(fā)的可同時(shí)檢測(cè)香石竹斑駁病毒、黃瓜綠斑駁病毒、煙草脆裂病毒、百合無(wú)癥病毒和番茄斑萎病毒五種檢疫性植物病毒的五聯(lián)卡硝酸纖維素膜單抗檢測(cè)蛋白芯片，在15分鐘內(nèi)即可讀全部檢測(cè)結(jié)果，相較于傳統(tǒng)檢測(cè)一個(gè)病毒的十幾個(gè)小時(shí)，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。此科研成果引起了專(zhuān)家高度重視。

　　資料顯示，植物感染病毒后，對(duì)植物細(xì)胞的影響與動(dòng)物病毒一樣，會(huì)打亂植物細(xì)胞的正常代謝活動(dòng)，使植物的生長(zhǎng)和發(fā)育遭到破壞，從而降低農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒、百合無(wú)癥病毒都能造成蔬菜、花卉等重要經(jīng)濟(jì)作物的損失，其中番茄斑萎病毒、黃瓜綠斑駁病毒是重要外來(lái)檢疫對(duì)象，其余3種病毒由于其危害重大，在國(guó)內(nèi)和各省區(qū)之間也列為重要防疫對(duì)象。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年由于病毒病的危害，全世界的糧食損失達(dá)200億美元。病毒通常造成退綠、矮化、畸形等癥狀。由于病毒是專(zhuān)性寄生物，至今仍缺乏具有選擇性的高效治療藥劑，使病毒病日益嚴(yán)重，成為當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的一類(lèi)重要病害。所以，在口岸檢測(cè)中起阻斷、隔離的植物檢疫就是最好的防治手段。

　　北京檢驗(yàn)檢疫局《植物病毒蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)研究》項(xiàng)目組研究制備了上述5種病毒的單克隆抗體細(xì)胞株的單克隆抗體和多克隆抗體，并擁有了自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。該項(xiàng)目組負(fù)責(zé)人北京檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心副主任汪萬(wàn)春介紹，為方便使用，項(xiàng)目組同時(shí)研發(fā)了五聯(lián)卡硝酸纖維素膜單抗檢測(cè)蛋白芯片。相較于同類(lèi)研究采用玻璃等基質(zhì)制備芯片，硝酸纖維素膜基質(zhì)的使用降低了制備工藝難度和應(yīng)用對(duì)設(shè)備的依賴(lài)性；用硝酸纖維素膜為材料的蛋白芯片的基質(zhì)；用金顆粒標(biāo)記抗體；玻璃纖維素膜制備金標(biāo)墊；檢測(cè)靈敏多克隆抗體作為標(biāo)記抗體，單克隆抗體作為檢測(cè)抗體組裝芯片，相較于只用多克隆抗體作為檢測(cè)抗體，顯著地提高了檢測(cè)特異性；五種病毒同時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果15分鐘內(nèi)可讀，相較于傳統(tǒng)檢測(cè)一個(gè)病毒的十幾個(gè)小時(shí)，縮短了檢測(cè)時(shí)間，大大提高了檢測(cè)效率。

　　驗(yàn)收會(huì)上，專(zhuān)家們審查了項(xiàng)目組提交的相關(guān)資料，聽(tīng)取了項(xiàng)目組的工作報(bào)告和技術(shù)報(bào)告，并進(jìn)行了質(zhì)詢(xún)。參會(huì)專(zhuān)家對(duì)項(xiàng)目組的研究工作給予了充分的肯定。專(zhuān)家們一致認(rèn)為：該項(xiàng)目試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，方法科學(xué)，數(shù)據(jù)翔實(shí)，資料齊全，結(jié)果可靠，完成了計(jì)劃任務(wù)書(shū)規(guī)定的研究?jī)?nèi)容，達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平，一致同意項(xiàng)目通過(guò)鑒定，并建議盡快推廣應(yīng)用。

　　汪萬(wàn)春還介紹說(shuō)，該項(xiàng)目組根據(jù)研究成果申請(qǐng)了兩項(xiàng)國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利；在《INDIANJOURNALOFVIROLOGY》發(fā)表SCI研究論文1篇；制定了《番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒、百合無(wú)癥病毒快速篩選檢測(cè)蛋白芯片法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)1項(xiàng)，目前正在系統(tǒng)內(nèi)征求意見(jiàn)。

　　目前，檢測(cè)植物病毒的方法主要采用進(jìn)口抗血清檢測(cè)試劑盒進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）以及用電鏡直接觀察組織中的病毒粒子。從已有報(bào)道看，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)血清學(xué)檢測(cè)方法均基于多抗血清而建立的，商品ELISA檢測(cè)試劑盒也多是多抗血清，然而多克隆抗體存在非特異性高、準(zhǔn)確性和均質(zhì)性差、產(chǎn)量有限等不足，難以滿(mǎn)足日益增長(zhǎng)檢測(cè)需求；電鏡檢測(cè)需要昂貴的設(shè)備而不能普及應(yīng)用。因而迫切需要建立快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法，為病毒病的診斷提供技術(shù)支持。為此，本項(xiàng)目利用五種病毒的抗原免疫小鼠和大白兔，制備了五種病毒的單、多克隆抗體，開(kāi)展了檢測(cè)五種病毒的技術(shù)研究，開(kāi)發(fā)了蛋白芯片，為五種病毒的田間檢測(cè)及進(jìn)出口檢疫提供技術(shù)支撐和快速的檢測(cè)方法和產(chǎn)品。

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